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免疫學(xué)三大工具:IHC、ELISA和WB區(qū)別
在科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面，恒遠(yuǎn)生物為了幫助初學(xué)者快速上手，減少摸索苦惱，專門(mén)為大家準(zhǔn)備了一套標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)流程和技巧。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣本，ELISA、WB、IHC選哪個(gè)？看完這篇你就知道了。
IHC：
IHC免疫組化抗原技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）：
ELISA用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒(méi)有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開(kāi)始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。
Western bolt:
是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。可以用于定性和半定量。WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。
1.對(duì)于IHC來(lái)說(shuō)，定位是免疫組化最大的優(yōu)勢(shì)
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析首選方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。
2.WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過(guò)提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位)，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC。
3.ELISA與IHC相比，定量最準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測(cè)首選方法之一
尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果精確。IHC針對(duì)性比較強(qiáng)，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽(yáng)性或者陰性，一般不用于定量檢測(cè)。
4.WB和ELISA的區(qū)別
WB：可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩
ELISA：可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信。
WB：只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)elisa做不到
ELISA：可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響
WB：所檢測(cè)的一般是抗原，而elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。
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