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流式檢測(cè)

流式檢測(cè)

一、項(xiàng)目介紹

  流式細(xì)胞術(shù)是運(yùn)用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞或顆粒進(jìn)行光譜鑒定、細(xì)胞分選、計(jì)數(shù),廣泛用于分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子的表達(dá)水平、鑒定樣品中細(xì)胞群的不同細(xì)胞類型、評(píng)估各細(xì)胞亞群的純度以及分析細(xì)胞大小和內(nèi)含顆粒。主要利用熒光標(biāo)記的抗體檢測(cè)蛋白水平,或結(jié)合了特定細(xì)胞分子的熒光染料,如PI與 DNA 的結(jié)合。

二、應(yīng)用

  常用于細(xì)胞表面分子如表面標(biāo)記物的鑒定及水平分析,以鑒定、定性或定量特定類群的細(xì)胞,可以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平,可以利用特定染料分析細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡,利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位,利用DHE等染料檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平。

三、流式細(xì)胞儀通道

  流式細(xì)胞儀Beckman Coulter CytoFLEX;光學(xué)參數(shù):FSC(前散射)、SSC(側(cè)散射)、4色熒光通道;數(shù)據(jù)采集軟件:CytExpert。

激發(fā)波長(zhǎng) 通道 發(fā)射波長(zhǎng) 常見染料
488 nm FL1 525±20 nm FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488
FL2 585±21 nm PE、PI、DsRed
FL3 690±25 nm PerCP-Cy5.5、PC5
638 nm 660±10 nm APC、Alexa Fluor 647

四、結(jié)果展示

細(xì)胞周期

細(xì)胞凋亡

ROS檢測(cè)

JC-1線粒體膜電位

五、樣品保存運(yùn)輸

  1、流式樣本接收注意事項(xiàng)

  ①細(xì)胞凋亡

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光,一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注,否則按照無熒光處理。如果因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi),我方概不負(fù)責(zé),也不接受退單。

 ?、诩?xì)胞周期

  周期需要細(xì)胞量比較多,6 孔板送樣要求匯合度在70%以上,但不能超過90%。外地樣品,需用預(yù)冷的70% 乙醇固定過夜后(貼壁細(xì)胞需要消化后進(jìn)行固定),離心棄固定液,加1ml PBS重懸,封口膜封好,4℃運(yùn)輸寄到實(shí)驗(yàn)室。

  ③流式JC-1

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個(gè)空白孔,做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶紅光或綠光,不能檢測(cè)。

 ?、?nbsp;流式ROS

  需要活細(xì)胞(外地樣本不接)。細(xì)胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個(gè)空白孔,做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。如果細(xì)胞帶綠光,不能檢測(cè)。

 ?、菁?xì)胞表抗

  提前確定公司是否有相應(yīng)流式抗體(組化抗體不可用),其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。

 ?、?nbsp;流式三標(biāo)

  提前告知樣本具體數(shù)量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內(nèi)染色至少需要1.5 ml,表抗需要約1 ml),注意防止凝血,4℃保存運(yùn)輸。血樣4℃保存最多只能存放一周,時(shí)間越久實(shí)驗(yàn)結(jié)果越差。取血后,需盡快寄到實(shí)驗(yàn)室;取脾臟時(shí)盡量將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室,直接在實(shí)驗(yàn)室取材后開始實(shí)驗(yàn),若不能將動(dòng)物帶到實(shí)驗(yàn)室,取材(整個(gè)脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中,4℃保存,提細(xì)胞必須在取材后6 小時(shí)以內(nèi)完成,注意有些檢測(cè)指標(biāo)(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。

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