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如何處理植物組織培養過程中出現的各種污染?


在處理植物組織培養過程中,一不小心會出現各種污染,到底該如何預防呢?恒遠生物技術人員為大家總結,一起來看看吧!

一、污染原因判斷:
1.培養基污染:若污染菌類是零星分散在培養基中,則可確定是人為引起的污染。比如培養基滅菌不徹底,開瓶時間過長,滅菌后存放時間過長等; 高溫蒸汽滅菌器的溫度、壓力、時間沒有正確設置;過濾滅菌過程中濾膜孔徑選擇、過濾滅菌器的滅菌處理、過濾滅菌操作等均會影響培養基的滅菌效果。措施:嚴格按照實驗要求,滅菌規程操作。

2.外植體污染:若污染菌類是從材料周圍長起,且發生在 5 天以后,則說明是材料帶的內生菌。可能是接種用具滅菌不徹底,接種時材料被污染;若從培養基以下開始長菌,發生時間較早,且有從里向外的趨勢,則說明是切口引起的污染,原因可能是未剪去兩個切口或者雖剪去切口但是所用器具帶菌;或者是未及時發現污染苗,接種過程中引起交叉污染;措施:取材時應仔細選擇,以減少污染的發生。

3.操作環節污染:接種室是否清潔、干燥、密封,是否經常用紫外燈照射、甲醛熏蒸、70% 的酒精噴霧殺菌等;超凈工作臺擺放物品雜亂,長時間不換濾網,導致凈化能力降低;接種用具滅菌不徹底引起污染;操作不正確等。

措施:每次接種前半個小時,用 20% 的新潔爾擦洗室內設備、工作臺面,再用紫外燈照射 20 min。還可以噴灑 70% 的乙醇進行消毒。除了培養基、接種材料、器具和用具保證無菌外,同時在接種時還需要嚴格進行無菌操作。

二、出現污染后處理措施:
1.真菌污染后,如果已形成孢子,則必須經高壓滅菌后扔掉;若使細菌污染,只要及時發現,將材料上部未感染菌的部分剪下轉接,材料仍可以用。

2.用抗生素等殺菌藥劑的處理。但至今還未發現哪種抗生素能夠對各種菌都有效,并且常常也會影響植物材料的正常生長分化。另一些藥劑,雖有的殺菌效果好,但往往容易引起鹽害,也無法利用。

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