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還原糖含量試劑盒-可...

生化試劑盒

還原糖含量試劑盒-可見分光光度法

測定原理

加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內,還原糖含量與540nm吸光度成線性關系,根據標準曲線,即可求出樣品中還原糖的量。

中文名稱 還原糖含量試劑盒
規格 48樣
貨號

E-316-SH

價格 ¥500
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液、細胞培養上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法 可見分光光度法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業務員獲取
文獻 咨詢我司業務員獲取

    正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,是最常見的單糖和雙糖,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。


測定原理

加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內,還原糖含量與540nm吸光度成線性關系,根據標準曲線,即可求出樣品中還原糖的量。


自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。


試劑的組成和配制:

試劑一:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:15mL×1 4℃保存;


樣品中還原糖的提取

1、細菌或細胞的處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復30次),轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g25℃離心10min,取上清供測定用。

2、組織的處理:按照組織質量(g:試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.2g組織,加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g25℃離心10min,取上清供測定用。

3、血清(漿)的處理按照血清(漿)體積(mL:試劑一體積(mL)15~10的比例(建議0.2mL血清(漿)加入2mL試劑一),冰浴勻漿,轉移到有蓋離心管中(防止加熱時水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g25℃離心10min,取上清供測定用。


測定步驟

1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。

2、 調節水浴鍋至95℃。

3、 EP管中加入下列試劑:

試劑(μL

對照管

測定管

樣本

700

700

試劑二

 

 500

蒸餾水

500

 

 

將各管搖勻,在95℃水浴中加熱5min(蓋緊,防止水分散失),取出后立即冷卻至室溫,混勻。在540nm波長下讀取對照管和測定管吸光值。計算ΔA=A測定-A對照每個測定管需設一個對照管。

注意:如果ΔA大于2,需要將樣本用試劑一稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數(若顯色后出現分層現象,可改用蒸餾水稀釋)。


還原糖含量計算:

1、標準條件下測定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算:

還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA0.3034)÷W

3、按樣本蛋白濃度計算:

還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA0.3034)÷Cpr

4、按細菌或細胞密度計算:

還原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷1000×V1÷V2=0.239×(ΔA0.3034)

5、按血清(漿)體積計算:

還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA0.3034)÷ 8.3796×V1]÷V3×V1÷V2=1193.4×(ΔA0.3034) 

10001mg/mL=1000μg/mLV1:加入樣本體積,0.7mLV2:加入提取液體積,2 mLV3:加入血清(漿體積),0.2mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣質量,g1000:細菌或細胞總數,1000萬。

注意:最低檢測限為1mg/g鮮重或10μg/mg prot




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