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生化試劑盒

總糖含量試劑盒-可見分光光度法

測定意義:

糖類物質是構成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質等。

中文名稱 總糖含量試劑盒
規(guī)格 48樣
貨號

E-318-SH

價格 ¥280
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法 可見分光光度法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務員獲取
文獻 咨詢我司業(yè)務員獲取


測定意義:

糖類物質是構成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質等。

 

測定原理

總糖酸水解為還原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物,在過量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色,在540nm處有最大吸收峰,以此測定樣品中的總糖含量。

    正式測定前請選擇2-3個預期差異較大的樣本做預測定

 

自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體100mL×1 4℃保存;

試劑三:液體5mL×1 4℃避光保存;

 

樣品中糖的提取

組織:稱取約0.1g樣品,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,混勻,用蒸餾水定容至10mL8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)

液體樣本:取0.1mL樣本,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)

 

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至540nm,蒸餾水調零。

2、調節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表

試劑(μL

空白管

測定管

樣本

 

8

蒸餾水

16

8

試劑三

12

12

混勻,置95水浴中10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫

蒸餾水

 172

172

混勻,540nm測定吸光值,ΔA=A測定管-A空白管

注意:1、空白管只要做一管。

       2、如果ΔA大于2,需要將上清液用蒸餾水稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數。

 

糖含量計算:

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.3002x - 0.0507x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本鮮重計算:

糖(mg /g鮮重)= [(ΔA0.0507) ÷0.3002×V1]÷V1÷V2)×稀釋倍數=33.311×(ΔA0.0507) ÷W×稀釋倍數

3、按樣本蛋白濃度計算:

糖(mg /mg prot=[(ΔA0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀釋倍數=3.3311×(ΔA0.0507) ÷Cpr×稀釋倍數

V1:加入樣本體積,0.008mLV2:加入提取液體積,10mL Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g

4、按照液體體積計算:

糖(mg /mL=[(ΔA0.0507) ÷0.3002×V1]÷V3×V1÷V2)×稀釋倍數=116.59×(ΔA0.0507)×稀釋倍數

V1:加入樣本體積,0.008mLV2:加入提取液體積,10mL/3.5mL V3:液體樣本,0.1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g

 

注意:最低檢測限為1mg/g鮮重或10ng/mg prot

 


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