生化試劑盒
- 羧酸酯酶(CarE)試劑盒-可見分光光度法
- 恒遠生物生化試劑盒應用領域廣泛，涉及酶類、氧化應激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標儀，分光光度計和熒光酶標儀。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高效專業的生化代測服務和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些保證了我們向您提供的最專業最優質的服務
| 中文名稱 |
羧酸酯酶(CarE)試劑盒-可見分光光度法 |
| 規格 | 48樣 |
| 貨號 |
L-736-SH |
| 價格 | ￥300 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細胞裂解液、細胞培養上清液等 |
| 檢測范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測方法 |
可見分光光度法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業務員獲取 |
| 文獻 | 咨詢我司業務員獲取 |
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
哺乳動物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內源性與外源性物質水解，但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質運輸和代謝，并且與多種藥物、環境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關，有機磷農藥可結合并且抑制CarE活性。
測定原理：
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍顯色；在450 nm光吸收增加速率，計算CarE活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體30mL×2瓶， 4℃保存；
試劑三：粉劑×2支， 4℃保存，臨用前取1支試劑三，加1.2ml無水乙醇充分溶解；
試劑四：粉劑×2支，-20℃保存，臨用前取1支試劑四，加少量試劑二溶解；
工作液配制：臨用前配制，向1瓶試劑二中，加入溶解后的試劑三和試劑四各1支，充分溶解，過濾，4℃避光保存，可用1周。
樣本的前處理：
1、細菌、細胞樣品制備
收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200萬細菌或細胞加入400μL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）；12000g 4℃離心30min，取上清液待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿；12000g 4℃離心30min，取上清液待測。
3、液體：直接測定。
測定步驟：
1. 分光光度計預熱30min，調節波長到450 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL蒸餾水和1000μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2。△A空白管=A2-A1
4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL上清液和1000μL試劑二，迅速混勻，于450nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A3，第190s吸光值記為A4。△A測定管=A4-A3
注意：空白管只需測定一次。
CarE活性計算公式：
1 組織中CarE活性
（1） 按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在37℃反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；V樣：加入上清液體積，0.005 mL；T：反應時間，3min。V反總：1.005mL；蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
（2） 按照樣品質量計算
單位的定義：每g組織在37℃反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。
CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×（V樣總÷V樣）÷W÷T
= 67×(△A測定管-△A空白管)÷W
V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入上清液體積(mL)，0.005 mL；V反總：1.005mL；W：樣品質量（g）；T：反應時間（min），3min。
2 細菌或細胞中CarE活性
單位的定義：每1萬個細菌或細胞在37℃反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。
CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×（V樣總÷V樣）÷細胞密度（104 cell/mL）÷T
= 67×(△A測定管-△A空白管)÷細胞密度（104 cell/mL）
V總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入上清液體積(mL)，0.005 mL；V反總：1.005mL ；T：反應時間（min），3min。
3. 液體中CarE活性
單位的定義：每毫升樣品在37℃反應體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個酶活單位。
CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T
= 67×(△A測定管-△A空白管)
V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入上清液體積(mL)，0.005 mL；V反總：1.005mL；T：反應時間（min），3min。
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