生化試劑盒
- 乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒-微量法
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恒遠生物生化試劑盒應用領域廣泛，涉及酶類、氧化應激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富，涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標儀，分光光度計和熒光酶標儀。我們將以高度的責任感和出色的產品質量為客戶提供高效專業的生化代測服務和實驗技術解決方案。豐富的經驗、優良的品質、充足的庫存、準確的交貨時間、極具競爭力的價格，所有這些保證了我們向您提供的最專業最優質的服務。
| 中文名稱 |
乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒-微量法 |
| 規格 | 96樣 |
| 貨號 |
L-735-SH |
| 價格 | ￥380 |
| 樣本類型 | 血清，血漿，組織勻漿，細胞裂解液、細胞培養上清液等 |
| 檢測范圍 | 詳見說明書 |
| 檢測方法 |
微量法 |
| 貨期 | 3-5天 |
| 說明書 | 咨詢我司業務員獲取 |
| 文獻 | 咨詢我司業務員獲取 |
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
AchE屬于絲氨酸水解酶，廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿（Ach）水解，在神經傳導調節中起重要作用。
測定原理：
AchE催化Ach水解生成膽堿，膽堿與二硫對硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過測定412 nm吸光度增加速率，計算AchE活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。
試劑四：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。
粗酶液提取：
組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清液待測。
細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
血清等液體：直接測定。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30min。
3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻，于412nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2。△A測定管=A2-A1。
AchE活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
組織AchE活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（Cpr ×V樣）÷T
= 245×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（W ×V樣÷V樣總）÷T
= 245×△A÷W
細菌、細胞AchE活性
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T
= 245×△A÷細胞數量
血清AchE活性
活性單位定義：每毫升血清每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T
=245×△A
ε：TNB摩爾消光系數，13.6×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積（L），200μL=2×10-4L；V樣總：提取液體積，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入上清液體積（mL），0.02 mL；W ：樣品質量；T：反應時間（min），3 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
1. 組織AchE活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（Cpr ×V樣）÷T
= 490×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（W ×V樣÷V樣總）÷T
= 490×△A÷W
2. 細菌、細胞AchE活性
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T
= 490×△A÷細胞數量
3. 血清AchE活性
活性單位定義：每毫升血清每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。
AchE酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V反總×109)÷V樣÷T
=490×△A
ε：TNB摩爾消光系數，13.6×103 L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應體系總體積（L），200μL=2×10-4L；V樣總：提取液體積，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白濃度（mg/mL）；V樣：加入上清液體積（mL），0.02 mL；W ：樣品質量；T：反應時間（min），3 min。
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